TEMEL VETERİNER PATOLOJİ - Deneme Sınavı - 11

Mordant boyanın etkisini arttırır.

Meksika'da yetişen bir ağaçtan elde edilir.

Yunanca “Haimato”(kan) ve “Xylon”(odun) kelimelerinden türetilmiştir.

Etil alkolde çözülür.

1. Ksilol (iki kez en az 2-3 dakika), saf alkol, % 95’lik alkol , %70’lik alkol serilerinden, her biri en az on kez daldırılarak, geçirilir ve parafinden kurtarılır.
2. Çeşme suyundan geçirilir.
3. Hematoksilen solüsyonunda 2-5 dakika tutulur.
4. Tekrar çeşme suyundan geçirilir.
5. Gerekiyorsa aşırı boyanma için asit-alkol solüsyonuna (1000.0 ml % 70’lik
alkole 10 ml yoğun hidroklorik asit ilavesiyle hazırlanır) hızlıca birkaç kez
daldırılıp çıkarılır. Aşırı boyanma mikroskopta hızla kontrol edilir (çekirdek
belirginleşmeli ve zemin parlak veya renksiz olmalı).
6. Akar çeşme suyunda kısaca yıkanır.
7. Amonyaklı su (1000.0 ml çeşme suyuna 2-3 ml amonyak ilave edilir) veya
doygun lityum karbonat (100.0 ml distile suya 1.0 gr lityum karbonat ilavesiyle hazırlanır) solüsyonuna kesitler parlak mavi oluncaya kadar batırılır.
8. 10-20 dakika akar çeşme suyunda tutulur.
9. 15 saniye ila 2 dakika arasında ikinci boya solüsyonu olan eozin solüsyonunda tutulur.
10. % 70’lik alkol, % 95’lik alkol, saf alkol ve ksilolden (her birinden 2’şer kez
ve en az 2 dakika) geçirilerek şeffaflaştırılır ve kapatılır.

Sonuçlar:
Çekirdekler: Koyu mavi.
Sitoplazmik yapılar: Pembe-kırmızı

Oil Red O Boyası

1. 10-15 μm kalınlığındaki dondurma mikrotomu kesitleri 5-10 dakika kuruması için bekletilir.
2. %60’lık isopropanolde 30 saniye çalkalanır.
3. Oil red O boyasında 10 dakika boyanır.
4. Tekrar %60’lık isopropanolde birkaç saniye çalkalanır.
5. Akarsuda 2-3 dakika yıkanır.
6. Herhangi bir Hematoksilen solüsyonunda 2-3 dakika tutulur.
7. Çeıme suyunda 3 dakika yıkanır.
8. Mavi Scott solüsyonunda 3 dakika tutulur.
9. Çeşme suyunda 5 dakika yıkandıktan sonra jelatin yapştırıcı (Uygun ısıda
0.05 gr jelatin 20.0 ml distile suda çözdülür) ve lamel ile kapatılır.

Sonuçlar:
Yağlar: Turuncu- kırmızı veya parlak kırmızı. ; Çekirdekler: Mavi

Lillie’in Nil Mavisi Boyası

Tespit: %10’luk tamponlu nötral formalin veya genel bir tespit solüsyonu.
Bloklama: 5 μm parafin kesitler.
Boyama Solüsyonunun Hazırlanmaı: 0.05 gr Nile Blue A %1’lik sülfirik asit (1.0 ml yoğun H2SO4 /99 ml distile su) içinde çözdürülür.
Boyama işlemi:
1. Ksilol (iki kez en az 2-3 dakika), saf alkol, %95’lik alkol, %70’lik alkol serilerinden, geçirilir ve parafinden kurtarılır.
2. Yukarıdaki boya solüsyonunda 20 dakika boyanır.
3. Akarsuda 10-20 dakika yıkanır.
4. Jelatin kapama materyali ve lamel ile kapatılır.

Sonuçlar:
Lipofuskinler: Koyu mavi veya mavi-yeşil. ; Melanin pigmenti: Açık yeşil. ;
Eritrositler: Yeşilimsi-sarş veya yeşilimsi-mavi. ; Myelin: Yeşil ile koyu mavi arası. ;
Çekirdekler: Zayıf veya hiç boyanmaz.

Yukarıdaki süreç hangi tür bir boyama yöntemine aittir?

a) Kongo kırmızısı Boyası
Tespit: %10’luk tamponlu nötral formalin.
Bloklama: 5 μm parafin kesitler.
Boyama Solüsyonunun Hazırlanması:
Kongo kırmızısı Solüsyonu; 1.0 gr kongo kırmızısı 100.0 ml distile suda çözdürülür.
Doyurulmuş Lityum Karbonat Solüsyonu; yaklaşık 1.3 gr lithium carbonate
(Li2CO3) 100.0 ml distile suda çözdürülmek için karıştırılır.
Harris’in Hematoksilen Solüsyonu: (Bakınız sayfa)
Boyama İşlemi:
1. Ksilol (iki kez en az 2-3 dakika), saf alkol, %95’lik alkol, %70’lik alkol serilerinden, geçirilir ve parafinden kurtarılır ve distile suda yıkanır.

2. Kongo kırmızısı solüsyonunda 10-30 dakika boyanır.
3. Doyurulmuş lityum karbonat solüsyonunda 15 saniye tutulur.
4. Boyanın bulanıklığı giderilinceye kadar %80’lik alkolde renk giderilir. Sonra
akarsuda 15 dakika yıkanır.
5. Harris’in Hematoksilen solüsyonunda 1-8 dakika zıt boyama yapılır.
6. %1’lik asit alkolden geçirilir, distile suda yıkanır, amonyaklı suda mavileştirilir ve sonra suda yıkanır.
7. %95’lik alkol, absolut alkol ve ksilolden (her birinden 2’fler kez ve en az 2
dakika) geçirilerek şeffaflaştırılır ve kapatılır.

Sonuçlar:
Amiloid: Solgun pembeden kırmızıya kadar.
Çekirdekler: Mavi.