VİROLOJİ

intranasal- burun boşluğuna

intratrakeal- trake içine

intraperitoneal- periton içi

intramuskuler- kas içi

intravenöz- damar içi

Sonsuz sayıda pasajı yapılabilen ve genetik olarak köken aldığı dokudan tamamen farklılaşmış olan hücre kültürlerine devamlı hücre kültürü denir.

Süspansiyon halindeki bir sıvının santrifüjü sonrası, üstte kalan sıvı kısım süpernatanttır.

Hücreleri laboratuvar ortamında üretebilmek için kullanılan plastik türevi maddelerden imal edilmiş kültür şişelerine flask denir.

Hücre üretme vasatlarına gelişmeyi teşvik edici faktör olarak %10 oranında serum ilave edilir. Hücre üretme vasatlarına ayrıca bakteri kontaminasyonlarına karşı antibiyotikler (penisilin 100 UI/ml, streptomisin 100 µg/ml) ve mantar kontaminasyonlarına karşı antimikotikler
(mikostatin, 2,5 µg/ml) de ilave edilebilir.

Bir virüsün enfeksiyözite gücünün rakamsal olarak ifadesi o virüsün titresidir. Bu gücün belirlenmesi işlemine de virüs titrasyonu adı verilir. Virüsün titresi süspansiyonunda bulunan enfektif partikül sayısıyla ilgili bilgi verir. Titrasyon amacıyla sulandırmalar hazırlanır ve her sulandırma basamağında belli sayıda konakçı (hücre kültürü, EYT, denek hayvanı) sisteme ekilir. Test sonucunda konakçı sistemlerin en az yarısının enfekte olmuş olması beklenir. Titrasyon işleminde genellikle hücre kültürleri kullanılmaktadır ve elde edilen titre birimi Doku Kültürü İnfektif Doz (DKID50) olarak ifade edilir.

Mikrobiyolojik özelliklerine göre deney hayvanları 3’e ayrılmaktadır. Bunlar: · Konvansiyonel Hayvanlar · SPF (Spesifik Patojen Free) Hayvanlar · Germ Free Hayvanlar

Kültür kabına tutunmadan hücre vasatı içinde süspanse hade çoğalan kültürlere süspanse hücre kültürü adı verilir.

Hücre kültürlerinin yeni flakslara (plastik türevi maddelerden üretilmiş kültür şişeleri) alınarak çoğaltılmasına subkültür hazırlama (veya pasaj) elde edilen kültüre de subkültür denir.

Primer kültürlerin pasajlanmas›yla elde edilen ve genetik özellikleri bakımından köken aldığı dokuya en az %85 oranında benzerlik gösteren kültürlere diploid hücre kültürü denir.

Direk olarak dokulardan ayrıştırılarak elde edilen hücrelerin in vitro şartlarda üretilmesi ile elde edilen kültürlere primer hücre kültürü denir.

Titrasyonun başlıca amaçları: Virolojik ve serolojik çalışmalarda soyların standardizasyonu · Aşı hazırlanmasında virus dozunun ayarlanması · Virüslerin belirlenmesinde kullanılan fizikokimyasal testlerin değerlendirilemsi · Virüs soylarının saflaştırılması (Plak Test)

Kotun eritrositlerine karşı tavşanlarda elde edilen antikorlar amboseptör olarak adlandırılır.

Bir hastalık etkenine karşı antikor taşıdığı bilinen serum Pozitif Serum'dur.

Subkültür hazırlama prosedüründe açıklanan basamaklar takip edilerek hücreler pelet halinde elde edilir. · Bir miktar vasat ile sulandırılarak sayım yapılır ve en az 1×106 hücre/ml olacak şekilde sulandırılır. · Son sulandırmaya %10 dana serumu ve %10 DMSO eklenir. · Saklama tüplerine 1-2 ml hacimde paylaştırılıp derin dondurucuya kaldırılır.